Kendati demikian, Ayu masih sempat tampil kembali di acara tersebut sebelum akhirnya resmi hengkang dari sana.
Melansir Kompas.com, Ayu pertama kali berkonflik dengan Pesbukers pada tahun 2017 silam.
Saat itu ia mendadak hilang dan tidak hadir sebagai salah satu pengisi acara.
Di lain sisi Managing Director ANTV Otis Hahijary, melalui akun Instagram @otis__hahijary melontarkan sebuah sindiran.
"To whom it may concern, if you want to earn my respect, you better respect Antv and me!!!! or else.....!!!!!!!!
"(Kepada siapa saja yang berkepentingan, jika Anda ingin dihormati, sebaiknya menghormati Antv dan saya! atau lainnya!)," tulisnya pada Minggu (9/7/2017) dilansir dari Kompas.com, Selasa (21/4/2020).
Otis dalam postingannya juga mencatutkan nama para pengisi acara Pesbukers, dengan Ayu di paling atas.
Sejak itu muncul spekulasi bahwa Ayu Ting Ting didepak dari acara tersebut.
Ia dikabarkan dikeluarkan dari program Pesbukers karena minim tanggung jawab hingga telat hadir usai berlibur dari New Zealand.